IOSE80細胞培養說明書

一、名稱：IOSE80細胞

二、生長特性：     貼壁

三、細胞生長條件：

四、組成：

五、細胞傳代培養方法：

1、收到細胞，請查看瓶子是否有破裂，培養基是否漏出，是否渾濁，如有請盡快。

2、收到細胞，如包裝完好，請在顯微鏡下觀察細胞。,由于運輸過程中的問題，細胞培養瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來，顯微鏡下觀察會出現細胞懸浮的情況，出現此狀態時，請不要打開細胞培養瓶，先不要把培養基吸出來。應立即將培養瓶置于細胞培養箱里靜止3-5小時左右，讓細胞先穩定下，再于顯微鏡下觀察，此時多數細胞會重新貼附于瓶壁。如細胞仍不能貼壁，請用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，如臺盼藍染色證實細胞活力正常請按懸浮細胞的方法處理

3. 收到細胞時如無異常情況 ，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，用75%酒精（建議配置75%酒精的水也是滅菌超純水。噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作：然后打開蓋子，先用槍頭把培養基吸出10ML左右，放在離心管里，然后瓶口過火，（嚴禁直接傾倒），這樣可以保證不污染，再用10ML的移液管，將剩余的培養基全部吸出，放于離心管中，培養瓶中只剩余5-10ML左右培養液繼續培養就可以了）：超過80%匯合度時，請按細胞培養條件傳代培養。

如為懸浮細胞，吸出培養液，1000轉/分鐘離心3-5分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養基懸浮細胞后移回培養瓶。

4，將培養瓶置于37℃培養箱中培養，蓋子微微擰松。吸出的培養基可以保存在滅菌過的瓶子里，存放于4℃冰箱，以備不時之需。第二天換液時，要配制新鮮的培養基和進口胎牛血清。這樣對細胞生長更好。不要再用我們原瓶的培養基了。

5 、24小時后，細胞形態已恢復并貼滿瓶壁，就可以傳代了。（貼壁細胞）將培養瓶里的培養基倒去，加3-5ml（以能覆蓋細胞生長面為準）PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml  0.25%含EDTA的胰酶消化，消化時間以具體細胞為準，一般1-3分鐘，不超過5分鐘。可以放入37℃培養箱消化。輕輕晃動瓶壁，見細胞脫落下來，加入3-5ml培養基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細胞，使之*脫落，然后將溶液吸入離心管內離心，1000rpm/5min。棄上清，視細胞數量決定分瓶數，一般一傳二，如細胞量多可一傳三，有些細胞不易傳得過稀，有些生長較快的細胞則可以多傳幾瓶，以具體細胞和經驗為準。（懸浮細胞）用移液管輕輕吹打瓶壁，直接將溶液吸入離心管離心即可。

6，貼壁細胞 ，懸浮細胞。嚴格無菌操作。換液時，換新的細胞培養瓶和換新鮮的培養液和進口胎牛血清，37度    5%CO2 培養

7.  收到細胞后，請鏡下觀察細胞，用恰當方式處理細胞。若懸浮的細胞較多，請離心收集細胞，接種到一個新的培養瓶中。棄掉原液，使用新鮮配制的培養基，使用進口胎牛血清. 剛接到細胞，若細胞不多時 血清濃度可以加到15％去培養。若細胞迏到80%左右 ，血清濃度還是在10％。

特別注意：（如使用公共實驗室或初次接觸細胞培養，建議添加雙抗培養）

1. 收到細胞后請盡快更換為含15%血清的新鮮培養基，如因特殊情況需要繼續使用原瓶培養基，請在原瓶培養基中額外添加10%的血清（原瓶培養基的繼續使用時間zui長不宜超過72小時）
2. 貼壁細胞收到當天切忌立刻消化，請將細胞換液后放置培養箱孵育隔夜到第二天再做消化傳代，請優先選擇直徑6cm的培養皿進行傳代培養
3. 如簽收時出現培養瓶壁破裂，漏液等情況請及時做好照片記錄并慧穎實驗室。